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숭늉의 연구일지

[생물 임용 노트]단백질 정제와 정량 - 4) 웨스턴 블롯(western blot)

개요SDS-PAGE로 분리된 단백질을 전기영동으로 분리시켜 니트로셀룰로스(nitrocellulose) 필터에 옮긴 후('blot'이라고 함), 방사성 동위원소나 효소, 형광 물질이 결합된 특정 항체를 이용하여 단백질을 확인하고 단백질의 크기와 양을 조사하는 방법이다. 민감도가 높은 실험 방법이다.실험 과정전기영동이 끝난 gel과 필터(nylon, nitrocellulose, PVDF)를 겹친 후 전기영동 하여 gel에서 필터로 단백질을 이동 시킴1차 항체를 필터와 배양하여 섭씨 4도에서 오랜 시간동안 단백질과 1차 항체를 결합시킴계면활성제(Tween20)가 포함된 buffer로 씻어 냄1차 항체에 대한 항체(2차 항쳬)에 alkaline phophate 또는 HBP 같은 리포터 효소를 결합시켜 1차 항체..
생물학 임용노트/실험관련 2024. 8. 14. 14:58
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