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숭늉의 연구일지

[생물 임용 노트]유전자 클로닝과 실험기법 - 4) PCR과 cDNA 클로닝

PCR(polymerase chain reaction)StepⅠ. DNA 변성이중가닥 DNA를 94℃ ~ 98℃ 정도의 고온 처리하여 단일 가닥으로 변성시킨다.G-C 비율이 높을수록 온도를 높게 주고 시간을 길게 주어A-T 비율이 높을 수록 온도를 낮게 주고 시간을 짧게 주어시료 DNA가 완전히 풀어지게 한다. StepⅡ. 혼성화(annealing)50℃ ~ 65℃로 낮추어 DNA primer가 변성가닥의 DNA와 혼성화하게 함Tm 값을 적절히 유지하기 위해,primer 길이 길수록, 반응 온도를 높임GC 함량비가 높을수록, 반응 온도를 높임반응온도가 높으면 혼성화율이 낮아지고, 반응온도가 낮으면 비특이적 결합률이 높아짐StepⅢ. DNA 합성호열성 세균에서 추출한 Taq polymerase로 DNA를 ..
생물학 임용노트/실험관련 2024. 8. 21. 16:22
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