숭늉의 연구일지

단백질 시료를 빠르게 확인하고 정량화하는 방법 중 하나이다.실험 방법96-well 폴리스티렌 플레이트의 비활성 표면에 단백질 시료 부착 후 세척비점유 자리에 케이신을 채움검출하고자 하는 단백질에 대한 항체를 항온 처리세척 후 2차 항체 처리기질 첨가 후 발색시켜 강도를 측정하여 정량화샌드위치 ELISA결합 순서가 1차 항체 - 단백질 - 2차 항체(단백질에 대한) - 효소가 결합된 3차 항체 - 기질 첨가 순으로 하여 발색시킨 후 흡광도를 측정하는 방식이다.면역 측정법(immunoassay)항원을 항체가 결합된 라텍스에 처리해 항원-항체 반응을 일으켜 응집물을 형성 시켜 이들을 육안으로 확인할 수 있게 하는 방법이다.대표적인 예시> 임신 키트; 오줌 속의 HCG를 항 HCG로 검출하는 방법

개요SDS-PAGE로 분리된 단백질을 전기영동으로 분리시켜 니트로셀룰로스(nitrocellulose) 필터에 옮긴 후('blot'이라고 함), 방사성 동위원소나 효소, 형광 물질이 결합된 특정 항체를 이용하여 단백질을 확인하고 단백질의 크기와 양을 조사하는 방법이다. 민감도가 높은 실험 방법이다.실험 과정전기영동이 끝난 gel과 필터(nylon, nitrocellulose, PVDF)를 겹친 후 전기영동 하여 gel에서 필터로 단백질을 이동 시킴1차 항체를 필터와 배양하여 섭씨 4도에서 오랜 시간동안 단백질과 1차 항체를 결합시킴계면활성제(Tween20)가 포함된 buffer로 씻어 냄1차 항체에 대한 항체(2차 항쳬)에 alkaline phophate 또는 HBP 같은 리포터 효소를 결합시켜 1차 항체..

개요전기영동은 하전 된 입자가 전기장에서 반대 전하의 전극 쪽으로 이동하는 원리를 이용하여 물질을 분리하는 것을 말한다.방향은 전하의 종류에 따라 다르다.이동속도는 전하의 세기, 입자 모양, 입자 크기에 따라 다르다.고정상에 대한 저항의 정도에 따라 다르다.고정상은 agargose gel 또는 polyacrylamide gel을 사용한다.이동상은 시료이다.이동에 대한 힘은 전압이다.SDS-PAGE(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis)단백질을 음전하로 코팅하여 polyacrylamide gel에서 단백질 분자량에 따라 전기영동하는 방법이다. gel-polyacrylamide와 bis-polyacrylamide 등으로 구성되어 있으며, 서로 연결되어 구멍(pore)을 형성한..

종이 크로마토그래피개요이동상(색소)이 전개액에 대한 용해도(친화력), 분자의 크기, 전개지에 대한 흡착력에 따라 전개율이 달라지는 것을 이용하는 방식이다.용해도가 높아질수록, 분자의 크기가 작을수록, 흡착력이 낮을수록 전개율이 높다.실험 과정 예시시금치잎에 석영과 모래를 넣고 으깬 뒤에 메탄올:아세톤 = 3:1 혼합용액에 넣고 색소를 추출한다.용지를 자르고 아래에서 2cm 지점에 원점을 표시한 후 시료를 점적한다.톨루엔을 매스 실린더 아래 2cm만 넣고 용지를 아래 1cm 잠기도록 장치한다.전개액이 종이 상단에 도달시 각 색소를 표시한다.전개율 = 원점에서 색소 까지의 거리 / 원점에서 용매전선 거리관 크로마토그래피(column chromatography)특이한 화학적 특징을 지닌 고정상을 이루는 물질을..

개요원심력을 이용하여 세포 내 구성물을 크기와 밀도 및 용해도 정도에 따라 분리하는 것 → 분리 속도는 침강계수 또는 S로 나타낸다.침강속도 영향을 미치는 요인부력 : 침강에 저항하는 힘으로 밀도가 클수록 작다.수용성 : 입자의 크기가 클수록 불용성 정도가 높다.입자 모양 : 점성에 의한 저항력의 차이가 존재한다. 긴 모양이 구형보다 먼저 침전한다.입자 질량 : 질량이 클 수록 더 빨리 침전한다.입자 밀도 : 밀도가 클수록 빨리 침전한다. 종류속도 침전(velocity sedimentation)5~20% 설탕 용액을 사용하여 관의 아래로 갈수록 설탕 농도를 증가하게 만든 뒤, 시료를 용액 위에 중층 하여 원심력을 가하는 방식이다.크기와 밀도가 다른 입자들이 서로 다른 영역에 띠를 이루면서 서로 다른 속도..

T4 - "DNA 대사"타이민이 없는 배지에서 복제가 가능하다. 여러 핵산 대사 효소를 갖고 있다.G와 염기쌍을 형성하는 C 대신 HMC(5-hydroxymethyl cytosine)을 갖는다.T4는 DNA 상 C를 인식하고 공격하는 nucelease를 갖고 있어, HMC는 이런 효소로부터 자신의 DNA를 보호한다.대장균은 HMC를 인식하여 분해하는 endonuclease를 갖고 있다.DNA 포장 시 잘리는 위치는 특정 서열이 아닌 포장된 크기에 따라 달라진다. 이를 headful mechanism이라고 한다.포장되는 DNA는 하나의 파지에서 양 말단의 서열이 동일하다. - 말단부 중복하지만 각 파지에서 이러한 말단부 서열은 다르다. - 순환적 치환 T7 - "전사 단계 조절"DNA 구조** 숫자는 전사..

Bacterio phage : 박테리아를 숙주로 바이러스. 세균 내에서만 증식이 가능하고, 별도로 존재 가능하다. 이들은 숙주의 리보솜, 단백질 합성인자, 아미노산, 에너지 생산 시스템을 이용한다.생존에 필요한 최소 기능핵산 변형 물질 차단자신의 핵산을 박테리아를 주입감염된 세균을 다량의 파지를 생산하는 시스템으로 전환감염 세균에서 자손 파지 방출유전 물질가장 보편적으로 이중나선 DNA를 가지며, 원형 DNA, 외가닥 원형 DNA, RNA 등 다양한 방식으로 존재한다.유전 물질의 분자량도 종간에 큰 차이가 있고 클수록 더 많은 유전자를 갖고 복잡한 생활사가 가능하다.기본 구조유전 물질과 단백질 외피로 구성된다.꼬리의 유무 : 꼬리가 있음 or 꼬리가 없음단백질 외피 - capsid의 형태 : 정이십면체 ..

F 인자F plasmid의 기능을 가지기 위한 요소를 포함한다.복제 조절 요소 : ori.v(복제 원점), inc, rep전달이 시작되는 위치 - ori.T(전달 원점)전달과 관련된 유전자군 - tra operon염색체의 삽입, 절제 과정을 조절 - IS2, IS3접합Ledurberg & tatum 실험Y10 균주 - thr- leu- thi- bio+ phe+ Cys+Y2 균주 - thr+ leu+ thi+ bio- phe- Cys-→ 두 균주를 섞어주자 최소 배지에서 야생형 균주가 자라기 시작함"유전자의 전달과 재조합이 일어난다." 같은 균주를 필터를 가운데 놓고 U자관 양쪽에 첨가 시 재조합이 일어나지 않음→ "세균의 유전자 재조합에 물리적 접촉이 필요하다."F+ cell과 F- cell접합에서 유..